实验操作分享：干细胞诱导成骨实验

一、接种骨髓间充质干细胞

取对数生长期的细胞，按照2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞培养皿中，将接种好的细胞培养皿放到37℃，5% CO2细胞培养箱培养，定期观察细胞增殖状态，当细胞融合度达60-70%时，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。

二、细胞分化诱导

每2-3天进行换液（定期观察是否有污染），再放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养约2-3周，并注意观察细胞形态变化。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，进行下一步染色鉴定。

三、细胞固定

用吸头（确保吸取充分）吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞培养皿底面，室温固30-60min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

四、茜素红染色

加入适量茜素红染液染3-5min，吸去茜素红染液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS避免细胞干燥。

五、诱导评估

显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节会与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。