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    免疫荧光技术-间接法

    发布时间： 2021-10-26　　点击次数： 1900次
    材料与仪器：

    抗体
    PBS 伊文氏兰
    显微镜


    实验步骤：

    1. 标本固定后，PBS洗涤3x3 分钟；

    2. 滴加一抗，37 ℃40 分钟或4 ℃过夜；

    3. PBS洗3x3 分钟；

    4.  滴加荧光标记二抗37 ℃，40 分钟；

    5.  PBS洗3x3 分钟；

    6.  0.1 %伊文氏兰复染；

    7.  PBS洗3x3 分钟；

    8.  缓冲甘油封片，镜检。


    要点：
    1.种属在进行双重免疫标记时，要选择来源于两种不同种属动物的一抗，如选择来源于rabbit和mouse的抗体，二抗则用带有不同荧光素标记的，如抗rabbit或抗mouse二抗， FITC和Tex-Red;
    2.孵育时间和温度相同的两种一抗可以同时孵育，然后加入相对应的一抗的二抗进行孵育，一抗孵育时间室温至少需要16h,二抗孵育室温不宜超过4h,选择4℃孵育比较好，背景比较清晰，另外孵育时夏天特别注意室温温度；
    3.抗体稀释液通常第一抗体选择1%牛血清白蛋白进行稀释，第二抗体选择用0.01mol/L的PBS稀释。



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