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补体介导法细胞毒实验

发布时间： 2021-11-01　　点击次数： 1402次

材料与仪器
C57BL／6J小鼠
Hank’s液单克隆抗体补体伊红-Y染液
眼科剪眼科镊平皿不锈钢网试管吸量管尖吸管载玻片盖玻片显微镜
实验步骤

一、实验方法

1. 小鼠胸腺细胞悬液的制备：将4～6周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4 ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1 000 rpm，5分钟，用Hank’s液洗两次。将沉淀的细胞重悬于Hank’s液中，配成1×107/ml细胞悬液。

2. 取试管3支，标明顺序，依据下表依次加入1×107/ml胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1的单克隆抗体(最适稀释度)及Hank’s液，放入37℃水浴30分钟。

3. 取出后每管加入1%伊红-Y染液1滴，混匀，室温放置2分钟。

4. 重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3管中细胞死活情况。

二、实验结果

死细胞呈红色，无光泽且肿胀变大；活细胞不着色、有光泽且形态正常。

高倍镜下计数200个细胞并计算其中死细胞的百分数。计算公式如下：死细胞百分数= EQ EQ \F(实验管死细胞数%-对照管死细胞数%，100%-对照管死细胞数%)

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