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大鼠大脑皮层神经元细胞培养实验——机械性划割培养

发布时间： 2021-12-05　　点击次数： 1291次

材料与仪器
SD大鼠
硼酸硼砂缓冲液胰酶-EDTA 消化液 D-Hanks’
眼科剪滴管离心机培养皿 CO2培养箱
步骤

一、实验步骤

1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴（匕匕）妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中。

2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次。

3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。

4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的 DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤 2～3 次。

5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。

6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打成单细胞悬液。

7. 细胞计数，调整细胞密度按1.5x105/cm2 种入6 孔板内，放入CO2 孵箱中培养。培养48 h 后换液并加入Ara-C使其终浓度为 1x10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量换液。以后每隔 3 天半量换液一次。

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