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大鼠肝星状细胞培养技术

发布时间： 2021-12-06　　点击次数： 1193次

材料与仪器
雄性 SD 大鼠
戊巴（匕匕）妥钠小牛血清 DMEM 酶消化液I、Ⅱ Nycodenz D-Hanks’液 HBSS 台盼兰
手术器械尼龙网相差显微镜荧光显微镜
步骤

一、实验步骤

1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管。

2. 以D-Hanks‘液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。

3. 待肝脏变软后，离体肝脏并剪碎，继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min，尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃，下同)。

4. 以HBSS 重悬沉淀至10 ml，再混以20 ml Nycodenz 液，分置于离心管中，并分别覆以2-3 ml HBSS，1450 g 离心16 min 后取界面细胞。

5. 以HBSS重悬后再次离心收集细胞，以DMEM重悬后进行细胞计数，并判断存活率和产量，最后按照常规方法接种(105 细胞/cm2 )，次日换液，以后每2-3 天换液一次。

6. 传代方法：弃去培液后以D-Hanks’液洗两次，加0.125%胰酶(原代最好加0.05% EDTA)消化，镜下观察细胞突起回缩(2-5 min左右)，以*培液(DMEM+10% NBS)终止反应(若不用EDTA，可以不需离心)，充分吹打后以 1:2-1:3 接种，然后继续培养(5% CO2，37℃)。

二、结果
接种次日，光镜下可见细胞呈星芒状，胞质内有脂滴，荧光镜下328 nm 处见自发荧光。附照片(图 1)。

图 1. 原代培养第 2 天的大鼠肝星状细胞

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