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哺乳动物中制备基因组 DNA 实验

发布时间： 2021-12-14　　点击次数： 1131次

材料与仪器
动物组织
PBS 乙酸铵乙醇酚氯仿异戊醇 TE
离心机摇床研钵
步骤

1. 切下组织并立即剪成小块，置于液氮中冻结。

2. 将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用锤子将其捣为细粉末，每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。

3. 500 g 离心细胞5 min，弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。

4. 细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬，500 g 离心5 min，弃上清，重复1次。

5. 用1体积的消化缓冲液重悬细胞。

6. 将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。

7. 用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品，1 700 g 离心10 min。

8. 如果样品溶解得不好，再加1体积不含蛋白酹K的消化缓沖液，并重复离心。

9 如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层（水溶液）转移至一个新管中。

10. 加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉，1 700 g 离心2 min。

11. 用70%乙酵洗涤，晾干，沉淀用TE。

12. 缓冲液重新溶解，使终浓度在约1 mg/ml 左右。

注意事项
1. 如果是用肝组织，要除去胆囊，因其含有高水平的各种消化酶。
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