细胞铺板具体操作及流程

细胞铺板是细胞实验中的基础操作，其目的是将细胞均匀分布在培养板上，以保证实验结果的准确性和可重复性。下面为你介绍详细操作流程：

1.实验准备

材料：细胞悬液、培养基、胰酶、PBS 缓冲液、血清、96 孔板或 24 孔板等培养板。

器材：移液器及配套枪头、离心机、细胞培养箱、超净工作台、倒置显微镜。

试剂配制：提前配制好含 10% 血清的培养基，若细胞贴壁性差，还需用多聚赖氨酸对培养板进行包被处理，即将适量多聚赖氨酸溶液加入培养板各孔，室温孵育 1-2 小时，吸去溶液，用 PBS 冲洗 2-3 次，晾干备用。

2.细胞悬液制备

取出细胞：从培养箱中取出长满细胞的培养瓶，在超净工作台内，用移液器吸去瓶内旧的培养基。

清洗细胞：向瓶内加入适量 PBS 缓冲液，轻轻晃动培养瓶，润洗细胞 1-2 次，以去除残留培养基及杂质，吸去 PBS。

消化细胞：加入适量胰酶溶液，覆盖细胞层，将培养瓶置于显微镜下观察，当细胞开始变圆、脱离瓶壁时，立即加入含血清的培养基终止消化。血清中的蛋白可中和胰酶活性，防止过度消化。

吹打细胞：用移液器反复轻柔吹打细胞层，使细胞全部分散成单细胞悬液。吹打过程要控制力度，避免产生过多气泡损伤细胞。

离心收集：将细胞悬液转移至离心管，以 1000-1500 转 / 分钟的速度离心 3-5 分钟，使细胞沉淀在管底。

重悬细胞：吸去上清液，加入适量新鲜培养基，用移液器轻柔吹打，将细胞重悬，制成均匀的细胞悬液。

3.细胞计数

稀释细胞悬液：取少量细胞悬液，用培养基按 1:1 或 1:2 的比例稀释，避免细胞浓度过高难以计数。

加载细胞悬液：将稀释后的细胞悬液滴加在血细胞计数板的计数区，注意不要产生气泡，盖上盖玻片。

计数细胞：在显微镜下，计数计数板四个大格内的细胞总数。压线细胞遵循 “计上不计下，计左不计右" 原则，避免重复计数。根据公式计算细胞浓度：细胞浓度（个 /mL）=（四个大格细胞总数 / 4）× 稀释倍数 ×10^4 。

4.细胞铺板

计算铺板体积：根据实验需求和培养板规格，确定每孔所需细胞数量。如 96 孔板每孔一般接种 5×10^3 - 2×10^4 个细胞，24 孔板每孔接种 5×10^4 - 2×10^5 个细胞。根据细胞浓度计算所需细胞悬液体积，如细胞浓度为 1×10^5 个 /mL，96 孔板每孔需接种 1×10^4 个细胞，则每孔需加入细胞悬液体积为 100μL。

铺板操作：用移液器吸取计算好体积的细胞悬液，加入培养板相应孔中。从培养板一侧边缘开始，逐孔加入，避免液体溅出和产生气泡。加样过程中，若需接种多块板，应保持移液器操作一致，确保每孔细胞数量均匀。

轻柔混匀：加样完成后，将培养板在水平桌面上轻轻晃动，或使用平板振荡器，低速振荡 1-2 分钟，使细胞在孔内均匀分布。注意振荡幅度不宜过大，以免细胞聚集。

5.培养观察

放入培养箱：将铺好细胞的培养板放入 37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。CO₂可维持培养基 pH 值稳定。

定期观察：培养 2-4 小时后，在倒置显微镜下观察细胞贴壁及分布情况。若发现细胞分布不均，可轻微调整培养板位置，继续培养。后续每天定时观察细胞生长状态，包括细胞形态、密度等，为后续实验做准备。

细胞铺板过程需严格遵守无菌操作原则，动作轻柔，确保细胞活性及分布均匀性，这样才能保证实验顺利进行。

安培生物致力成为推动生命科学进步值得信赖的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业。总部设在广东，服务面向全国。安培生物集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司，旨在为生命科学的发展提供较好的产品与服务。本公司建立了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、信号传导和神经科学等领域的产品供应线，在各个领域内向用户提供较高的水平和质量稳定的产品，安培生物致力于为广大的科研机构、高等院校等客户提供各种产品、技术支持与服务。可以在第一时间为用户提供比较先进的专业资讯和完备的产品和物流服务。 专业的技术力量使得我们能够为广大用户提供强大的技术支持，深厚的人脉资源使得我们在全国主要城市拥有众多的合作伙伴，安培生物非常荣幸能将世界上先进的高科技产品推荐给国内从事生物学领域科研的老师和同仁。作为专业性的产品供应商，公司出资存备了大量现货，配合优秀的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供服务