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免疫细胞转染时相关事项要了解！

发布时间： 2021-10-06　　点击次数： 1358次

　　常规免疫细胞转染技术可分为两大类：一类是瞬时转染，一类是稳定转染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测；后者也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。
　　免疫细胞转染时的相关事项：
　　1.细胞密度
　　一般来说，当细胞密度达到60%-80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。
　　2.细胞状态
　　这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。尽量选择无支原体污染的细胞，支原体污染是肉眼看不到的，可用支原体检测试剂盒进行检测，确保无支原体污染。
　　3.细胞种类
　　不同细胞种类的细胞在做转染时所需要的转染体系是不同的，不能一种体系用在所有类型细胞的转染实验。
　　4.DNA纯度
　　在制备高纯度DNA时，还需要对DNA进行内毒素的去除，内毒素的存在会造成细胞毒性，严重影响转染效率，现在市面上有很多去除内毒素的DNA纯化试剂盒可供选择。
　　5.转染试剂
　　脂质体试剂的毒性大，尽量选用脂质体的转染试剂。另外，在大规模使用前，需进行转染试剂和核酸优比例的摸索。

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