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使用zeta life转染试剂过程应注意以下几点

发布时间： 2022-12-09　　点击次数： 1579次

　　zeta life转染试剂用于将DNA和siRNA转染到真核细胞系和各种原代细胞中，可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞，如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等，可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞。
　　使用zeta life转染试剂过程要注意以下几点：
　　1.细胞密度：转染质粒时，细胞密度为80-100%，转染RNA(siRNA或miRNA)时，细胞密度为60-80%，具体细胞密度必须结合考虑核酸种类、转染试剂种类和细胞生长密度极限。
　　2.RNA用量：10-30 pmol/孔（以24孔板为例），具体用量根据转染效率检测实验确定。
　　3.试剂用量：转染试剂说明书推荐了一个使用范围，具体用量根据转染效率检测实验确定。
　　4.根据转染效率检测实验确定核酸的用量及转染试剂的用量（核酸与转染试剂的比例关系），转染效率检测实验一般在24孔板中进行，其他格式的培养器皿请根据底面积的比例进行计算。
　　5.转染试剂使用前才从4℃中取出，取用前，先短暂离心，然后放在涡旋振荡器上点动混匀三次，每次持续1秒，混匀后短暂离心，上述措施是为了混匀转染试剂，保证使用效果，使用后立即放回4℃保存。
　　6.核酸和转染试剂分别用Opti-MEM稀释，稀释的核酸可以通过弹匀，吹打均匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀，稀释的转染试剂可以通过弹匀，颠倒混匀或涡旋点动混匀，不可使用吹打均匀；混匀后均需短暂离心。
　　7.把稀释的核酸和稀释的转染试剂复合混匀时，应该把稀释的核酸加入稀释的转染试剂中（顺序不可调转）；加入后立即进行（不要耽搁）弹匀或颠倒混匀，先不进行短暂离心，待所有的管子复合完毕后，在一起进行涡旋点动混匀三次，每次持续1秒，然后短暂离心。
　　8.转染复合物孵育形成时尽量避光室温或37℃放置。
　　9.进行RNA转染时，尽量使用无酶及灭菌处理的耗材。

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